Test Culture In Vitro

skin of steel a écrit:

Question con; on peut stériliser avec un autoclave? (classe b)

Oui bien sur c'est le must pour la stérilisation des milieux et des outils ! par contre pour les graines et fragments de plantes tu ne peux pas passé à côté de l'étape d'installation (bain dans les 5 béchers)

Intéressant, j'en ai deux au boulot^^

Grrr moi aussi je vais devenir tatoueur, perceur !! rien que pour avoir ça

ah bien que tu testes, tiens nous au courant !!!

locarnivore a écrit:

ah bien que tu testes, tiens nous au courant !!!

Pour être au courant mets les doigts dans la prise

Bon les choses se précisent ! =)
J'ai fais la liste de ce qui me manquais, ya plus qu'a allez faire les courses !
J'ai aussi fais des test de place dans le panier cocotte minute et au final mes "bocaux" sont vraiment gros ( je pense pas que se soit un avantage ... je vais devoir manger des pots pour bébé qui sont apparemment top pour la CIV) et je peux donc en mettre que 2 ... je vais donc utiliser 2 cocottes pour mon premier test donc 4 " bocaux" soit environ 400ml de milieu.

Sachant que j'avais envie d'en ensemencer un avec du trichoderma pour voir un peu ce que ça fait et tant qu'a faire je testerais sans doute une bouture à l'intérieur, au pire elle meurt mais bon c'est pas grave c'est pas le but de cette expérience
Je me passionne de plus en plus pour ce truc, en tapant Tissue culture dans google ( "culture in vitro" en anglais) on peux voir des vidéo impressionnantes sur la reformation du plante à partir de tissus, comme avec un banane par exemple ...

Et faut aussi que je finisse le "protocole", car j'ai pas mal d'info un peu éparse mais le plus dur c'est de tout regroupé et de synthétisé !
Je ferais sans doute mon premier essaie en fin de semaine ! je croise déjà les doigts

Bref à suivre !

C'est bien cool tous ça

mais tu veux faire quoi exactement avec la culture C-I-V

enfin quelle est le but

Je dois avoir le protocole pour la CIV mais j'ai pas mon cahier de TP avec moi.

Citation :

mais tu veux faire quoi exactement avec la culture C-I-V scratch

enfin quelle est le but Question

Bah en fait ya pas vraiment de but c'est juste histoire de voir comment ça se passe et histoire de changer un peu et vu que je suis un peu touche à tout ( ....) bah j'avais envie d'essayer =)

Citation :

Je dois avoir le protocole pour la CIV mais j'ai pas mon cahier de TP avec moi.

Ah bah c'est super ça ! bah écoute je vais finir celui là avec les info que j'ai choppé à droite à gauche et on pourra compléter avec le tiens si tu veux le but de ce protocole c'est de réunir un peu toute les info au même endroit histoire ne facilité le travail de ceux qui voudrait êut être essayer par la suite.

De mémoire il y a une histoire de plusieurs bain, dont un avec de la javel. Mais ça remonte à loin on faisait ça en première année. Par contre pou la manipulation on la faisait sous psm. Milieu préparé à la cocotte. Il faut faire chauffer le milieu dans un bocal avec le couvercle fermé mais sans forcer. Surtout un fond d'eau dans la cocotte sinon ça crame et là faut gratter. 3-4cm d'eau suffisent. Tu mets tes bocaux dans la cocotte, tu fermes et verrouille. Tu laisse chauffer. Dès qu'elle siffle c’est signe qu'elle sous pression tu laisses alors comme ça pendant 20minutes ton milieu sera alors stérilisé. Quand tu le sors il faut impérativement un bain marie à 50°C sinon ton agar fige. L'ajout des hormones se fait après stérilisation au bec bunsen car elles sont sensibles à la chaleur.
Voilà de mémoire ce qui me revient.

Citation :

Quand tu le sors il faut impérativement un bain marie à 50°C sinon ton agar fige.

Bah j'avais un peu près tout sauf ça c'est vrai que quand on voit certain préparation les fragments de tissue sont parfois completement dans le milieu et pas juste en surface ! j'ai lu que la partie coupée devait de plus être en contact avec la gélose donc une gelose assez mole faciliterait ça

Merci !
Fred

Lucien a écrit:

locarnivore a écrit:

ah bien que tu testes, tiens nous au courant !!!

Pour être au courant mets les doigts dans la prise

j'avais pas vu ça, mais quelle nouille celui la

locarnivore a écrit:

Lucien a écrit:

locarnivore a écrit:

ah bien que tu testes, tiens nous au courant !!!

Pour être au courant mets les doigts dans la prise

j'avais pas vu ça, mais quelle nouille celui la

Logann tiens

oui c'est moi

locarnivore a écrit:

oui c'est moi

Je sais que c'est toi grand trouduc

Lucien a écrit:

locarnivore a écrit:

oui c'est moi

Je sais que c'est toi grand trouduc

encore heureux que papi n'ai pas perdu la boule

locarnivore a écrit:

Lucien a écrit:

locarnivore a écrit:

oui c'est moi

Je sais que c'est toi grand trouduc

encore heureux que papi n'ai pas perdu la boule

Toi je vais aller a Perpignan te botter le train

dede718 a écrit:

Citation :

Quand tu le sors il faut impérativement un bain marie à 50°C sinon ton agar fige.

Bah j'avais un peu près tout sauf ça c'est vrai que quand on voit certain préparation les fragments de tissue sont parfois completement dans le milieu et pas juste en surface ! j'ai lu que la partie coupée devait de plus être en contact avec la gélose donc une gelose assez mole faciliterait ça

Merci !
Fred

Pour les fragments dans le milieu je connais pas, erreur de manipulation ou autre technique ? Moi ce que je ferai c’est qu'une fois stérilisé je le maintiendrait au bain marie à 50°C le temps d'installer la manipulation suivante. Tu ajoutes tes hormones. Et ensuite tu coules dans tes flacons ou alors tu laisses dans le bocaux. A partir de là ça va prendre en masse. Pour un gros volume genre 400mL il faut pas mal de temps pour que tout la gélose prenne en masse je pense une bonne heure à température ambiante. Et il te ne reste plus qu'à déposer tes fragments.
Après avant de te lancer dans tes manipulations je te conseille de faire un témoin de stérilité. Tu mets un peu de ton milieu dans un petit flacon stérile et tu laisses environ 72h à 20-25°C. Après 72h tu verras si ton milieu est contaminé. En général apparition de colonies rondes et beige c'est des levures, pour le reste c'est des moisissures et c'est facilement identifiable.

Sinon qu'entend tu par la partie coupée ? Tu veux dire la partie ayant subit l'incision ? Pour cette partie je ne peux te confirmer que ce que je dis est vrai mais selon toute hypothèse c'est logique. C'est à cet endroit que les cellules de la feuille sont accessibles car les autres sont protégés par une pellicule dont je n'ai plus le nom en tête. C’est pour ça que lorsque j'avais fait ce TP nous avions coupé un morceau de feuille en forme de carré pour avoir 4 zones avec des cellules en contact avec la gélose.

Une dernière chose, la contamination peut venir de la stérilisation de ton matériel, du manipulateur mais aussi de tes fragments. Il ne faut pas négliger cette partie. Les végétaux sont très facilement porteur de spores et même bactéries. Le bain par eau de javel est impératif avec un temps à déterminer.

Lucien a écrit:

locarnivore a écrit:

Lucien a écrit:

locarnivore a écrit:

oui c'est moi

Je sais que c'est toi grand trouduc

encore heureux que papi n'ai pas perdu la boule

Toi je vais aller a Perpignan te botter le train

si tu veux mais prends quelques dionées avec toi

locarnivore a écrit:

Lucien a écrit:

locarnivore a écrit:

Lucien a écrit:

locarnivore a écrit:

oui c'est moi

Je sais que c'est toi grand trouduc

encore heureux que papi n'ai pas perdu la boule

Toi je vais aller a Perpignan te botter le train

si tu veux mais prends quelques dionées avec toi

Tu perds pas le nord Logann

oh non jamais

Tiens un petit article sur le développement de l'aldrovanda en CIV !

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Citation :

Sinon qu'entend tu par la partie coupée ? Tu veux dire la partie ayant subit l'incision ? Pour cette partie je ne peux te confirmer que ce que je dis est vrai mais selon toute hypothèse c'est logique. C'est à cet endroit que les cellules de la feuille sont accessibles car les autres sont protégés par une pellicule dont je n'ai plus le nom en tête. C’est pour ça que lorsque j'avais fait ce TP nous avions coupé un morceau de feuille en forme de carré pour avoir 4 zones avec des cellules en contact avec la gélose.

Oui c'est bien ça

Citation :

Une dernière chose, la contamination peut venir de la stérilisation de ton matériel, du manipulateur mais aussi de tes fragments. Il ne faut pas négliger cette partie. Les végétaux sont très facilement porteur de spores et même bactéries. Le bain par eau de javel est impératif avec un temps à déterminer.

Oui à la javel c'est pas super super pour les fragments
Par contre pour le test je pourrais pas le faire car je stérilise la gélose déjà dans les flacons mais bon je verrais bien si ça foire tant pis

Pour la javel de mémoire c'est le seul moyen. Mais tant que ton fragment n’est pas tout blanc c'est bon. Tu observera d'abord un blanchissement en périphérie qui prendra de l'ampleur avec le temps. De mémoire mais je n'en suis pas sur la javel vide les cellules végétales en laissant intact les structures. D'où l'apparition de blanc car la chlorophylle part mais aussi avec le matériel génétique. Il y a un virage de couleur à observer sur le fragment pour savoir quand il est stérilisé mais je ne sais plus si c’est du vert foncé au vert clair ou inversement.

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J'ai développé ça dans le 2.
Ya aussi l' Hypochlorite de calcium qui à la particularité de ne pas pénétrer dans les tissus

Citation :

Il y a un virage de couleur à observer sur le fragment pour savoir quand il est stérilisé mais je ne sais plus si c’est du vert foncé au vert clair ou inversement.

Ah ça je n'étais pas au courant, j'étais au courant pour le blanc par contre mais bon si c'est logique c'est donc dans le sens que tu as donné ci dessus, je regarderais si j'observe ça

Fred